Енвд как считать: Расчет ЕНВД для ИП: формула, примеры — Контур.Бухгалтерия

Как рассчитать ЕНВД? — «Моё дело»

Единый налог на вмененный доход – специальный налоговый режим, при котором сумма налога рассчитывается, исходя из вмененного дохода – потенциально возможного дохода плательщика ЕНВД. Налоговым кодексом в отношении каждого вида деятельности, по которому может применяться режим ЕНВД, установлены значения физического показателя и величина базовой доходности единицы этого показателя.

Налоговая ставка ЕНВД установлена в размере 15 процентов. Налоговым периодом является квартал.
В общем случае налоговая база по ЕНВД за квартал для каждого вида деятельности и по каждому месту ее ведения определяется по формуле:

Базовая доходность за месяц

?

(

Величина физического показателя за первый месяц квартала

+

Величина физического показателя за второй месяц квартала

+

Величина физического показателя за третий месяц квартала

)

?

Коэффициент-дефлятор К1

?

Коррек-тирующий коэффи- циент К2

=

Налоговая база (вмененный доход) за квартал

Если деятельность в одном из месяцев квартала осуществлялась не весь месяц, налоговая база за этот месяц определяется пропорционально количеству дней фактического ведения деятельности.

Сумма ЕНВД за квартал рассчитывается отдельно по каждому виду деятельности и по каждому месту ее ведения по формуле:
Налоговая база (вмененный доход) за квартал ?15% = Сумма налога (ЕНВД) за квартал

Вмененный налог ЕНВД для ИП и ООО

ЕНВД отменён с 2021 года, пользоваться этим режимом больше нельзя. Зато ИП можно перейти на очень похожую патентную систему налогообложения. Читайте о ней в специальной рубрике нашей справочной.  У ООО остаётся один вариант — упрощёнка. Понятные статьи-инструкции про УСН — читайте в справочной Эльбы. 

 

Единый налог на вменённый доход (ЕНВД) — система налогообложения, которая подходит только для определённого бизнеса. ЕНВД заменяет сразу несколько налогов: НДС, НДФЛ индивидуального предпринимателя, налог на прибыль ООО и налог на имущество. Налог зависит не от дохода, а от размера бизнеса.

Кто может применять ЕНВД

ЕНВД действует по всей России, кроме Москвы. Вы можете перейти на ЕНВД, если у вас ИП или ООО, в которых не больше 100 сотрудников. Исключение — ООО, где 25% или больше уставного капитала принадлежит другой организации.

Виды бизнеса, попадающие под ЕНВД, устанавливают местные власти. Вот общий перечень, на который они ориентируются:

• Розничная торговля через небольшой магазин до 150 кв.м. Нельзя применять ЕНВД для торговли через интернет-магазин или по каталогам.
• Общественное питание с залом для посетителей не больше 150 кв.м.
• Бытовые услуги населению — ремонт обуви, бытовой техники, пошив одежды и другие услуги в соответствии с распоряжением Правительства.
• Перевозка людей и грузов, если в собственности не больше 20 машин.
• Ремонт, техобслуживание и мойка автомобилей.
• Ветеринарные услуги.
• Сдача в аренду мест на автостоянках.
• Размещение наружной рекламы на рекламных конструкциях — щитах, стендах, табло — и транспорте.
• Сдача в аренду жилья.
• Сдача в аренду земли для торговли и общепита.
• Сдача в аренду торговых мест на рынке или в торговом комплексе, палаток, лотков, а также точек общепита без залов обслуживания посетителей.

Найдите в вашем регионе виды деятельности, которые попадают под ЕНВД. Для этого зайдите на сайт налоговой, выберите регион и посмотрите местный закон в последнем разделе «Особенности регионального законодательства». 

🎁

Новым ИП — год Эльбы в подарок

Год онлайн-бухгалтерии на тарифе Премиум для ИП младше 3 месяцев

Попробовать бесплатно

Сколько платить

Размер налога на ЕНВД не зависит от доходов. Поэтому вы заранее можете посчитать, сколько придётся платить, и оценить выгоду. Налог рассчитывается по формуле:

Налог за месяц = Базовая доходность х Физический показатель х К1 х К2 х Ставка налога

Базовая доходность — месячный доход, установленный Налоговым кодексом для вашего вида бизнеса.

Физический показатель — размер одного из показателей бизнеса: площадь торгового зала, число работников, количество транспортных средств и т.д. Узнайте, по какому физическому показателю измерять бизнес, в пункте 3 статьи 346.29 Налогового кодекса.

К1 — коэффициент, который ежегодно устанавливает правительство. В 2019 году равен 1,915, в 2020 году — 2,005.

К2 — коэффициент, определённый местным законом и не превышающий 1. Найти К2 для вашего бизнеса можно на сайте налоговой вашего региона в разделе «Особенности регионального законодательства».

Ставка налога — от 7,5% до 15%. Пока ни в одном регионе не введена пониженная ставка, поэтому везде применяется 15%.

Налог можно уменьшить на страховые взносы. ИП без сотрудников уменьшают налог полностью на взносы за себя. ИП с сотрудниками и ООО уменьшают налог не более чем наполовину, и только на страховые взносы за сотрудников по вменённой деятельности, а также на больничные за первые три дня.

 С 2017 года ИП с сотрудниками смогут уменьшить налог не только на взносы за сотрудников и больничные, но и на взносы за себя, всё так же соблюдая ограничение в 50% от суммы налога. 

Статья актуальна на 05.02.2021

Расчет ЕНВД и отпуск за свой счет

ООО занимается ремонтом и техобслуживанием автотранспортных средств. Применяется ЕНВД. В связи с уменьшением заказов на ремонт машин два сотрудника находились в отпуске за свой счет в течение месяца. Как рассчитать величину физического показателя для расчета ЕНВД?Опубликовано в журнале «Бухгалтерские вести» №13 от 13 апреля 2010

При расчете среднесписочной численности работников руководствуются Приказом Росстата от 12.11.08 №278 «Об утверждении Указаний по заполнению форм федерального статистического наблюдения: №П-1 «Сведения о производстве и отгрузке товаров и услуг», №П-2 «Сведения об инвестициях», №П-3 «Сведения о финансовом состоянии организации», №П-4 «Сведения о численности, заработной плате и движении работников», №П-5(м) «Основные сведения о деятельности организации».

Расчет среднесписочной численности работников производится на основании ежедневного учета списочной численности работников и соответствует данным табеля учета рабочего времени, который включает как явившихся, так и не явившихся на работу работников.
Согласно п. 82 Указаний в списочную численность как целые единицы за каждый календарный день включаются работники, которые находятся с разрешения администрации в отпуске без сохранения заработной платы по семейным или иным причинам, а так же отправлены в отпуск по инициативе администрации (подп. У, Ф).
В пункте 83 перечислены категории работников, которые не включаются в списочную численность. Это, в частности, принятые по совместительству, переведенные на работу в другую организацию, без сохранения заработной платы в этой организации и т. д.
Соответственно на величину физического показателя при расчете ЕНВД отсутствие работника в связи с нахождением его в отпуске без сохранения заработной платы не повлияет, поскольку при расчете среднесписочной численности этот работник учитывается как полная единица.

Выделите фрагмент с текстом ошибки и нажмите Ctrl+Enter

Сведения о доходах ИП на ЕНВД

Отвечает Государственное управление по связи и массовым коммуникациям Псковской области

 

На Ваше обращение, поступившее в Администрацию области через Интернет-приемную Администрации Псковской области, Главное государственное управление социальной защиты населения Псковской области сообщает.

В соответствии с Приказом Министерства труда и социальной защиты Российской Федерации от 29.12.2017 №889н «Об утверждении порядка осуществления ежемесячных выплат в связи с рождением (усыновлением) первого ребенка и (или) второго ребенка, обращения за назначением указанных выплат, а также перечня документов (сведений), необходимых для назначения ежемесячных выплат в связи с рождением (усыновлением) первого ребенка и (или) второго ребенка» необходимо предоставить сведения о доходах членов семьи за последние 12 месяцев, предшествующих месяцу подачи заявления.

Согласно письму Департамента налоговой и таможенно-тарифной политики Министерства финансов Российской Федерации от 31.01.2013          № 03-11-10/1925 в целях назначения мер социальной поддержки органами социальной защиты населения, расчет дохода индивидуальным предпринимателем, осуществляющим деятельность, облагаемую единым налогом на вмененный доход, должен осуществляться исходя из дохода, полученного от ведения предпринимательской деятельности, уменьшенного на величину расходов, связанных с его получением, и на сумму налога, уплаченного в связи с применением указанной системы налогообложения.

Налогоплательщик единого налога на вмененный доход должен вести учет физических показателей, в том числе и их изменения в течение налогового периода.

При этом для индивидуальных предпринимателей — плательщиков единого налога на вмененный доход, а также применяющих упрощенную систему налогообложения, законодательством о налогах и сборах не предусмотрена обязанность ведения учета доходов в целях, не связанных с налогообложением.

В то же время, согласно пункту 4 статьи 346_11 и пункту 5 статьи 346_26 Кодекса налогоплательщики, применяющие упрощенную систему налогообложения и систему налогообложения в виде единого налога на вмененный доход, обязаны соблюдать порядок ведения расчетных и кассовых операций в наличной и безналичной формах, установленный в соответствии с законодательством Российской Федерации.

Порядок ведения расчетных и кассовых операций в Российской Федерации устанавливается Банком России.

В связи с этим полагаем, что для целей, не связанных с налогообложением, индивидуальный предприниматель, являющийся налогоплательщиком единого налога на вмененный доход или применяющий упрощенную систему налогообложения, вправе использовать для подтверждения полученных доходов документы, свидетельствующие о факте получения этих доходов (например, расчетно-платежные ведомости, приходные кассовые ордера и т.п.).

 

 

кредитных политик | Экологический дизайн

Advanced Placement (AP) и зачетные баллы уровня колледжа могут быть предоставлены на основании тестов College Board Advanced Placement. Студентам, которые прошли курс AP, работают в старшей школе и получают баллы, соответствующие университетским стандартам на экзамене AP, предоставляется AP, а также кредит колледжа. Полученный зачет колледжа рассматривается как переводной зачет без оценки, но учитывается при окончании учебы и отвечает другим особым требованиям, для которых он уместен.

Преподаватели программы устанавливают свои собственные правила выставления оценок и присвоения незавершенных работ. Особые условия могут быть отмечены в учебных программах. Во всех случаях учащиеся должны представить доказательства не зависящих от них обстоятельств, которые мешают им завершить урок. Студент и преподаватель должны заполнить письменное соглашение (форма доступна в офисах программы) с изложением условий завершения курса и подать это соглашение в деканат.

Обычно только учащимся на уровне 3000 или 4000 студий разрешается получить кредит на независимое обучение.Кредит на независимое обучение не может быть использован вместо необходимого основного курса или курса дизайн-студии.

Как правило, регистрироваться для самостоятельного обучения разрешается только студентам, имеющим средний балл не ниже 3.00. В зависимости от предложенной темы могут быть установлены дополнительные требования. Не более 3 часов зачетных единиц для самостоятельного обучения в течение одного семестра и не более 6 часов за все время зачисления студента, если только декан не сделает исключение.

Полное описание объема независимой работы, краткое изложение того, как она будет проводиться, и определение предполагаемых результатов должны быть представлены руководящему преподавателю не позднее, чем через пять дней после официального начала семестра.Описание должно быть одобрено преподавателем и администрацией программы до получения разрешения на зачисление на независимый учебный курс. Студенты должны позаботиться о деталях независимого учебного курса во время регистрации или задолго до начала семестра.

Кредиты на стажировки преподавателей, стажировки, стажировки и независимое обучение регулируются одними и теми же стандартами. Кредиты, полученные в качестве ассистента преподавателя, научного сотрудника или стажера, подлежат ограничению в 3 кредитных часа.Ассистентские преподаватели и стажировки предлагаются по принципу «прошел / не прошел».

Студент может выбрать до 6 часов семестра для получения степени бакалавра ENVD по принципу «прошел / не прошел», но эти кредиты должны попадать в категорию общих факультативов и не могут включать курсовую работу, преподаваемую в рамках Программы экологического дизайна.

Студенты должны обсудить со своим научным руководителем конкретные академические стандарты для повторения лабораторных, студийных и других курсов бакалавриата.Кредиты за повторные курсы не засчитываются в 120 семестровых часов, необходимых для окончания учебы.

студентов, обучающихся по программе экологического дизайна, имеют право участвовать в программах ROTC в кампусе Боулдера.

Студенты, заинтересованные в таких программах, должны связаться с профессором, отвечающим за выбранную ими программу ROTC (армия, флот, военно-воздушные силы), а также со своим научным консультантом по программе для получения информации о месте проживания и требованиях к учебной программе для получения диплома. Не более 8 кредитных часов курсов ROTC могут быть применены к степени B.EnvD.

Кредиты, передаваемые из других учреждений, ограничены количеством кредитных часов, предоставленных для аналогичной работы в регулярных предложениях в Университете Колорадо, и должны соответствовать уровню качества, ожидаемому в CU. Декан по письменному ходатайству может делать исключения из этого правила.

Программа не принимает работы по профессиональному / техническому обучению в области дизайна, графики или строительства как отвечающие конкретным требованиям курса программы; он также не считает такую ​​курсовую работу приемлемой для выполнения требований программы по выбору.Только в исключительных случаях студент может обратиться к директору программы с просьбой о переводе таких кредитов.

Оценка C- или выше требуется для любого курса, за который предоставляется кредит при переводе из другого учебного заведения в университет. Для того, чтобы переводной кредит соответствовал требованиям основной степени, в переводном классе требуется оценка B или выше. Оценки, полученные в других учебных заведениях (за исключением кампусов Университета Колорадо), не учитываются со средним баллом студента CU.

Посетите офис Регистратора для получения дополнительной информации о политике кредитных переводов.

Экологический дизайн: кубоулдер

Итак, я сейчас в ENVD, вот-вот начну свой выпускной год. Я также работаю в отделе, поэтому хорошо разбираюсь во всей системе. Они переставили некоторые классы, так как я был первокурсником, поэтому я не могу вам много рассказать об этом. В общем, вот чего ожидать:

• ОГРОМНОЕ время, потраченное на студию.Студия на первокурснике сделает или сломает тебя, половина моего первого года выплачивается после первого или двух семестров. Студия-первокурсница пока не занимается проектированием зданий или чего-либо еще, поэтому может быть довольно сложно понять, почему они заставляют вас делать то, что вы делаете (фотографировать у ручья, изучать программы Adobe, проектировать пчелиные домики и т. Д.). В конце концов, я вам обещаю, это в конечном итоге вам поможет.

• Но я не думаю, что действительно подчеркивал, насколько ОГРОМНЫ затраты времени. Я действительно не знаю многих людей, которые занимаются ENVD и внеклассными занятиями.Практически невозможно заниматься спортом (за исключением очного) или участвовать в греческой жизни. Я знаю людей, которые это делают, но это непросто. Я работаю 16+ часов в неделю поверх ENVD, и это становится непросто.

• Многие лекции покажутся пустой тратой времени. Некоторые из них. Но все равно нужно сдать. Так что просто иди в класс. Некоторые из учителей будут потрясающими, а некоторые будут самыми скучными людьми, которых вы когда-либо встречали. Вы не можете выбирать основные лекции или профессоров, поэтому вам просто придется смириться с этим.

• совет: заводите друзей. ENVD — это во многом сообщество. Особенно после того, как группа людей бросает учебу после первого года обучения, группа может стать довольно маленькой. Вы будете знать всех в своих классах, и вам следует постараться дружить практически со всеми из них. Пригодится. Для тестов кто-то делает руководство по изучению документации google, и когда время тестирования приближается, все в классе получают к нему доступ и уточняют его. Это вроде как помогает тем, кто уделяет больше внимания в классе, но это серьезная помощь для всех нас.

• Используйте DMC. Они начинают лучше рассказывать об этом первокурснику, но это действительно хороший ресурс. Последний этаж здания, бесплатно сдам практически все, что вам нужно. И вы можете получить помощь по программному обеспечению. И вы можете распечатать в большом масштабе. И вы можете фотографировать моделей. На этой заметке …

• сфотографируйте свои модели. Вы поблагодарите себя позже.

Хорошо, это все, что я могу придумать, но не стесняйтесь задавать любые конкретные вопросы.Также, если вам понадобится помощь после начала семестра (если вы не супер извращенец или что-то в этом роде), я могу вам помочь. О, есть еще программа наставничества для первокурсников. Тебя подбирают со старшим, ты встречаешься с ними раз в месяц и можешь попросить их о помощи и тому подобное. Я никогда не участвовал, поэтому не могу рекомендовать его, но он существует.

SEC.gov | Превышен порог скорости запросов

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматизированных инструментов.Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов за пределами допустимой политики и будет обрабатываться до тех пор, пока не будут приняты меры по объявлению вашего трафика.

Укажите свой трафик, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

Чтобы узнать о передовых методах эффективной загрузки информации с SEC.gov, в том числе о последних документах EDGAR, посетите sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте о программе открытых данных SEC, в том числе о передовых методах, которые делают загрузку данных более эффективной, и о SEC. gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу [email protected].

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Код ссылки: 0.5dfd733e.1630073388.211665ac

Дополнительная информация

Политика интернет-безопасности

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности.В целях безопасности и для обеспечения того, чтобы общедоступная услуга оставалась доступной для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузки или изменения информации или иного причинения ущерба, включая попытки отказать пользователям в обслуживании.

Несанкционированные попытки загрузить информацию и / или изменить информацию в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры 1996 года (см. Раздел 18 U.S.C. §§ 1001 и 1030).

Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не влияет на возможность доступа других лиц к контенту SEC.gov. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, которые отправляют чрезмерное количество запросов. Текущие правила ограничивают пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества машин, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса (-ов) могут быть ограничены на короткий период.Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.gov. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерного автоматического поиска на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, чтобы повлиять на людей, просматривающих веб-сайт SEC. gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы гарантировать, что веб-сайт работает эффективно и остается доступным для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

Среднеквадратичная ошибка протокола ENVD в Системе 1 для переменного фильтра …

Молекулярная коммуникация (MC) — это новая парадигма инженерной коммуникации. Основная характеристика систем MC заключается в том, что информация встроена в свойства сигнальных молекул, например их количество, тип и время высвобождения передатчиком, что отличается от традиционных систем связи, которые включают информацию в свойствах электромагнитных волны, например их амплитуда, частота и фаза.Системы MC предназначены для революционных приложений, например, для обнаружения целевого вещества в биотехнологии, адресной доставки лекарств в медицине и мониторинга нефтепроводов или химических реакторов в промышленных приложениях. Основное внимание в этой диссертации уделяется теоретическому проектированию коммуникации и анализу систем MC. В частности, мы разрабатываем эффективные схемы оценки канала, символьной синхронизации и обнаружения для систем MC, как описано ниже. Оценка канала: знание импульсной характеристики канала (CIR) обычно необходимо для проектирования системы связи.В литературе по MC обычно предполагается, что либо известен CIR, либо принимается конкретная, обычно чрезмерно упрощенная, модель канала MC и оцениваются параметры модели. В этой диссертации для систем MC разработана общая основанная на обучении структура оценки CIR, которая не ограничивается конкретной моделью системы MC и не требует знания параметров канала. Синхронизация символов: Синхронизация символов относится к оценке начала символьного интервала и необходима для надежного обнаружения.Поэтому в этой диссертации разработано несколько схем синхронизации символов, которые учитывают практические проблемы систем MC, а именно то, что передатчик может не быть оснащен внутренними часами и может быть не в состоянии испускать молекулы с фиксированной частотой высвобождения. Когерентное обнаружение: когерентные детекторы используют информацию о состоянии канала (CSI) для восстановления данных. Системы MC подвержены зависимому от сигнала диффузионному шуму из-за процесса подсчета молекул, межсимвольной интерференции и внешних мешающих молекул.Принимая во внимание эти ухудшения, оптимальный фильтр, максимизирующий отношение сигнал / шум плюс помехи, выводится как функция мгновенной CSI системы MC. Показано, что в отличие от канала аддитивного белого гауссовского шума в традиционной беспроводной связи, простой коррелятор канала не является оптимальным для приемников подсчета молекул. Некогерентное обнаружение: схемы некогерентного обнаружения желательны для применения в системах MC, поскольку они не требуют знания мгновенной CSI, которую может быть трудно получить в практических сценариях MC.Поэтому в данной диссертации предлагается несколько некогерентных многосимвольных детекторов. Показано, что если количество символов, используемых для обнаружения, достаточно велико, производительность предлагаемых детекторов приближается к характеристикам оптимального когерентного детектора, который предполагает совершенное знание CSI. Обнаружение без CSI: хотя предлагаемым некогерентным детекторам не требуется мгновенная CSI, статистическая CSI все же необходима. Чтобы ослабить это требование, в этой диссертации показано, что класс кодов, а именно коды с постоянным составом (CC), облегчают обнаружение последовательности максимального правдоподобия (ML) в приемнике, не требуя мгновенной или статистической CSI.Соответствующий детектор без CSI получен и имеет простую структуру. Следует отметить, что для всех вышеупомянутых сценариев оценки / обнаружения соответствующий оптимальный ML (или максимальный апостериорный) модуль оценки / детектора выводится и служит в качестве верхней границы производительности. Кроме того, предлагается несколько субоптимальных оценщиков / детекторов низкой сложности, которые могут быть более подходящими для приложений в практических системах MC с ограниченными вычислительными возможностями. Анализ производительности и всесторонние результаты моделирования предоставляются для оценки эффективности всех предложенных оценщиков / детекторов.

Мобильное электронное национальное декларирование поставщиков | The Land

Теперь доступна новая мобильная версия электронной системы декларирования национальных поставщиков, которая обеспечивает эффективную и удобную платформу для комплектования партий домашнего скота.

Разработанный компанией Integrity Systems, обновленный eNVD имеет ориентированный на пользователя дизайн, который прост в навигации, устраняет дублирование и может быть заполнен на мобильном устройстве или настольном компьютере аккредитованными производителями Livestock Production Assurance, откормочными площадками и участниками цепочки создания стоимости.

Обновленный eNVD является частью набора изменений в Национальную декларацию поставщика, развернутого в 2020 году, коллективно разработанных, чтобы предоставить производителям и участникам цепочки поставок более простой, более эффективный и экономичный способ взаимодействия с красным мясом Австралии. система целостности. Другие изменения включают выпуск обновленных версий NVD для всех видов в июле и вывод системы eDEC из эксплуатации в конце года.

NVD сообщает о статусе пищевой безопасности каждого животного каждый раз, когда оно движется по цепочке создания стоимости — между объектами, складами или переработчиками.

Главный исполнительный директор ISC доктор Джейн Уэтерли сказала, что набор изменений является ответом на обширные консультации с заинтересованными сторонами отрасли и их рекомендации для ISC.

«Обновленный eNVD обеспечивает быструю и интуитивно понятную систему для комплектования партий скота и выполнения требований программы LPA», — сказал д-р Уэтерли.

«Перед выпуском для индустрии красного мяса он прошел тщательные испытания, и ISC продолжит обновлять систему, чтобы обеспечить наилучшее взаимодействие с пользователем в отрасли.

«Благодаря проверке на местах новый eNVD усиливает отслеживаемость и доступ к рынку, а также гарантирует, что производители предоставляют информацию, соответствующую последним требованиям рынка.

« Внедрение новой eNVD проще и точнее для всей цепочки поставок. Все партии товаров находятся в одном месте и мгновенно доступны в Интернете, что позволяет заинтересованным сторонам входить в систему и просматривать eNVD, включая получателей партии товаров или животных ».

Чтобы начать использовать новую eNVD, перейдите по адресу https: // envd.Integritysystems.com.au и войдите в систему, используя свои учетные данные LPA.

История Мобильная электронная декларация национального поставщика, удобная для мобильных устройств, впервые появилась на Farm Online.

Идентификация генов устойчивости к алкогольному стрессу Synechocystis sp. PCC 6803 с использованием адаптивной лабораторной эволюции | Биотехнология для производства биотоплива

Адаптивная лабораторная эволюция

Synechocystis sp. PCC 6803 в условиях стресса изобутанолом

Устойчивые к изобутанолу штаммы были получены в ходе экспериментов по длительному пассажу с культивированием.Перед пассажем культур Synechocystis sp. PCC 6803 культивировали при различных концентрациях изобутанола (0, 1, 2, 3 и 5 г / л) для определения подходящей концентрации для ALE. OD ₇₃₀ через 72 часа снизилась наполовину в среде, содержащей 2 г / л изобутанола, по сравнению с образцами без изобутанола (дополнительный файл 1: рис. S1). Пассирование культур проводили с использованием среды, содержащей 2 г / л изобутанола. Поскольку в экспериментах ALE можно получить различные эволюционировавшие штаммы с различными мутациями, было выполнено четыре независимых пассажа культур.Взаимосвязь между удельной скоростью роста и накопленным временем культивирования во время экспериментов ALE показана в дополнительном файле 1: рис. S2. Очевидно, что удельные скорости роста во всех четырех культурах увеличивались до 500 ч. Хотя агрегация клеток наблюдалась до 300 часов, клетки в конечном итоге разделились. Поскольку через 1000 часов не наблюдалось увеличения удельной скорости роста, развитые клетки через 1824 часа хранили при -80 ° C. Четыре штамма, названные T (1), T (2), T (3) и T (4), были выделены из хранимых культур Nos.1, 2, 3 и 4 соответственно.

Для оценки толерантности к изобутанолу четырех эволюционировавших штаммов, полученных в результате экспериментов с ALE, родительский и развитый штаммы культивировали при различных концентрациях изобутанола (0, 1, 2, 3 и 5 г / л). Удельная скорость роста эволюционирующих штаммов увеличилась по сравнению с родительским штаммом с более чем 2 г / л изобутанола (рис. 1). Кроме того, эволюционировавший штамм рос в присутствии 5 г / л изобутанола, который полностью подавлял рост родительского штамма.Хотя агрегация клеток наблюдалась в родительском штамме, этого не наблюдали в эволюционировавших штаммах, подвергшихся воздействию 2 г / л изобутанола (рис. 2 и дополнительный файл 1: рис. S3).

Рис. 1

Удельные скорости роста родительских и эволюционировавших штаммов при различных концентрациях изобутанола. Звездочки указывают на значительные различия между родительскими и эволюционировавшими штаммами (t-тест, P <0,05). Удельную скорость роста рассчитывали на основе OD ₇₃₀ 0 и 48 часов каждой периодической культуры.Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения трех повторов

. Рис. 2

Флокуляция клеток родительских, эволюционирующих и нокаутных штаммов при различных концентрациях изобутанола (0, 2 и 5 г / л)

Пересеквенирование всего генома эволюционировавших штаммов

Для исследования мутаций внутри эволюционировавших штаммов было выполнено ресеквенирование всего генома с использованием секвенатора MiSeq посредством секвенирования парных концов с длиной считывания 250 п.н.Глубина охвата составляла примерно 100–200 прочтений. Выявленные мутации эволюционирующих штаммов суммированы в виде диаграммы Венна на рис. 3. Количество мутаций в штаммах T (1), T (2), T (3) и T (4) составляло 2, 12, 2, и 2 соответственно. Штаммы T (1) и T (4) обладали мутациями в mcpA , тогда как штаммы T (2) и T (3) обладали мутациями в hik43 . Все четыре эволюционирующих штамма обладали мутациями в envD . Никаких мутаций не было обнаружено в областях, не связанных со шнуром. Подробная информация о мутациях представлена ​​на рис. 3 и таблица 1. Поскольку штамм T (2) обладал мутацией стоп-кодона в mutS , который кодирует белок репарации ошибочного спаривания ДНК, во время ALE накопилось большее количество мутаций, чем в других эволюционировавших штаммах. Сообщалось, что mcpA и hik43 участвуют в биогенезе пилей для генерации подвижной силы [20], а envD участвует в транспорте токсина [21]. Результаты ресеквенирования генома предполагают, что эти общие мутации mcpA , hik43 и envD в эволюционировавших штаммах могут быть связаны с наблюдаемой повышенной толерантностью к изобутанолу.

Рис. 3

Выявленные мутации эволюционировавших штаммов путем пересеквенирования генома. Эти мутации были обнаружены в 80% соответствующих считываний и были подтверждены секвенированием по Сэнгеру. * Штамм T (2) обладает восемью другими мутациями, описанными в Дополнительном файле 1: Таблица S1

Таблица 1 Подробная информация о мутациях эволюционировавших штаммов

Поскольку мутации mcpA в штаммах T (1) и T (4) приводят к сдвигу рамки считывания и преждевременному стоп-кодону, результирующие предполагаемые усеченные продукты составляют соответственно 75 и 30 аминокислотных остатков из 869 аминокислот. остатки.Эти усеченные изделия не должны функционировать из-за своей короткой длины. Мутация hik43 в T (2) также приводит к сдвигу рамки считывания и преждевременному стоп-кодону. В результате предполагаемый усеченный продукт содержит только 252 аминокислотных остатка из 1095 аминокислотных остатков. Мутация envD в T (1) также приводит к сдвигу рамки считывания и преждевременному стоп-кодону. В результате предполагаемый усеченный продукт содержит всего 158 аминокислотных остатков из 1083 аминокислотных остатков. С другой стороны, предполагаемые продукты EnvD в штаммах T (2), T (3) и T (4) имели лишь несколько аминокислотных замен.

Влияние мутаций на толерантность к изобутанолу

Для оценки влияния мутаций в mcpA , hik43 и envD эволюционировавших штаммов на толерантность к изобутанолу, мутации и соответствующие делеции генов были введены в геном родительский штамм.

mcpA кодирует белок хемотаксиса, принимающий метил. Восстановление роста не наблюдалось при введении делеции mpcA в присутствии 2 г / л изобутанола (дополнительный файл 1: рис.S4). Агрегация клеток, которая наблюдалась в родительском штамме, была диспергирована в штамме ∆ mcpA (рис. 2 и дополнительный файл 1: рис. S5). Это указывает на то, что mcpA способствует агрегации клеток в условиях стресса изобутанолом. Штамм не рос в присутствии 5 г / л изобутанола, как и его родительский штамм. Штаммы mcpA-R1 и mcpA-R4 были сконструированы путем введения мутаций mcpA , полученных из штаммов T (1) и T (4), соответственно, в штамм ∆ mcpA .Поскольку штаммы mcpA-R1 и mcpA-R4 показали сходный фенотип с штаммом ∆ mcpA , мутации mcpA считались мутациями потери функции.

hik43 кодирует гистидинкиназу, которая является членом двухкомпонентного гибридного сенсора и регулятора. Поскольку мутации стоп-кодона произошли в hik43 штаммов T (2) и T (3) (Таблица 1), эти мутации также считались мутациями потери функции. Штамм ∆ hik43 показал тот же фенотип роста, что и мутанты mcpA в присутствии изобутанола (рис. 4). Агрегация клеток также диспергировалась в штамме ∆ hik43 в присутствии 2 г / л изобутанола (рис. 2), что указывает на то, что hik43 также способствует агрегации клеток при алкогольном стрессе.

Рис. 4

Удельные скорости роста штаммов ∆ mcpA / ∆ envD и ∆ hik43 / ∆ envD при различных концентрациях изобутанола.Звездочки указывают на значительные различия между родительскими и другими штаммами (t-критерий, P <0,05). Удельную скорость роста рассчитывали на основе OD ₇₃₀ 0 и 48 часов каждой периодической культуры. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения трех повторов

.

envD кодирует белок-переносчик оттока множества лекарственных препаратов резистентного деления клубеньков. Хотя удельная скорость роста штамма ∆ envD снизилась по сравнению с исходным штаммом, в присутствии 2 г / л изобутанола штамм ∆ envD рос в присутствии 5 г / л изобутанола, который полностью ингибирует рост родительского штамма (рис. 4 и Дополнительный файл 1: Рис. S6). Удельная скорость роста штамма ∆ envD была ниже, чем у развитого штамма. Штаммы envD-R1, envD-R2, envD-R3 и envD-R4 были сконструированы путем введения мутаций envD , полученных из штаммов T (1), T (2), T (3) и T (4). соответственно в штамм ∆ envD . Агрегация клеток наблюдалась во всех мутантах envD в присутствии 2 г / л изобутанола, а также в родительском штамме (рис.2 и дополнительный файл 1: рис.S7). Поскольку штаммы envD-R1, envD-R2, envD-R3 и envD-R4 демонстрировали фенотип, аналогичный штамму ∆ envD (дополнительный файл 1: рис. S6), мутации envD также считались утраченными — функциональные мутации.

Удельные скорости роста сконструированных штаммов с одиночными мутациями mcpA , hik43 и envD были ниже, чем у эволюционированных штаммов, полученных в экспериментах с ALE (рис. 4). Поскольку все четыре эволюционирующих штамма обладают комбинаторными мутациями mcpA и envD или hik43 и envD (рис. 3) предполагалось, что эволюционирующие штаммы приобрели способность толерантности к изобутанолу благодаря синергическому эффекту этих мутаций. Поскольку эти мутации mcpA , hik43 и envD считаются мутациями с потерей функции, толерантность к изобутанолу мутантов с двойной делецией (∆ mcpA / ∆ envD и ∆ hikD 43 envD и ∆ hikD 43 / envD штамма). Как и ожидалось, штаммы ∆ mcpA / ∆ envD и ∆ hik43 / ∆ envD показали идентичный рост с развитым штаммом при концентрациях изобутанола 0, 2 и 5 г / л (рис.4). Агрегация клеток диспергировалась в штаммах ∆ mcpA / ∆ envD и ∆ hik43 / ∆ envD в присутствии 2 г / л изобутанола (рис. 2). Эти данные свидетельствуют о том, что эволюционирующие штаммы приобретают толерантность к изобутанолу из-за потери функции mcpA и envD или hik43 и envD .

Оценка стрессоустойчивости по отношению к другим спиртам эволюционировавших штаммов.

Клетки, приобретающие стрессоустойчивость, проявляют толерантность к тому же типу стресса [18, 19].Была оценена толерантность образовавшихся штаммов к другим спиртам, таким как этанол, n -бутанол и изопентанол (рис. 5). Мутациями, важными для толерантности к алкоголю, были комбинаторные нарушения envD и mcpA или envD и hik43 . Поскольку оба штамма T (1) и T (4) имеют функциональные дефициты в mcpA и envD , а штаммы T (2) и T (4) имеют функциональные дефициты в hik43 и envD (рис.3), толерантность к алкоголю оценивалась для репрезентативных штаммов T (1) и T (2). Удельная скорость роста эволюционирующих штаммов увеличивалась по сравнению с исходным штаммом в присутствии 16 г / л этанола, который содержит меньше атомов углерода, чем изобутанол. В присутствии 1 и 3 г / л n -бутанола, который имеет такое же количество атомов углерода изобутанола с другой основной цепью, удельная скорость роста эволюционирующих штаммов увеличивалась по сравнению с исходным штаммом. При наличии 0.8 и 1 г / л изопентанола, который содержит больше атомов углерода, чем изобутанол с той же основной цепью, удельная скорость роста эволюционирующих штаммов также увеличилась по сравнению с исходным штаммом (рис. 5). Эти данные свидетельствуют о том, что эволюционирующие штаммы, полученные с помощью ALE при изобутанольном стрессе, проявляли толерантность к изобутанолу, а также к этанолу, n, -бутанолу и изопентанолу.

Рис. 5

Толерантность исходных и эволюционировавших штаммов к этанолу, н-бутанолу и изопентанолу.Звездочки указывают на значительные различия между родительскими и эволюционировавшими штаммами (t-тест, P <0,05). Удельную скорость роста рассчитывали из OD ₇₃₀ 0 и 48 часов каждой периодической культуры. Планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения трех повторов

.

Производство этанола с использованием развитого штамма

Выведенные штаммы показали устойчивость не только к изобутанолу, но и к этанолу (рис. 5). Было исследовано влияние толерантности к алкоголю на производство этанола.Штаммы, продуцирующие этанол родительского штамма и штамма T (1), названные штаммами SE и SE-T (1), были сконструированы путем введения гетерологичных генов для pdc и adhII из Zymomonas mobilis . Профили культур штаммов SE и SE-T (1) показаны на фиг. 6. Хотя удельная скорость роста штамма SE-T (1) была немного ниже, чем у штамма SE, повышенная продукция этанола наблюдалась в SE-T (1) штамм. Продуктивность этанола через 72 часа для штаммов SE и SE-T (1) составила 10.4 ± 0,4 и 14,8 ± 0,2 мг л ^-1 OD ^-1 соответственно.

Рис. 6

Профили культур штаммов SE и SE-T (1). а рост клеток и б концентрация этанола

Биозащита фермы | Мясо и животноводство Австралия

Биобезопасность фермы включает в себя ряд повседневных методов, которые могут помочь предотвратить попадание инфекционных заболеваний, вредителей и сорняков на территорию. Эти методы часто документируются в плане биобезопасности фермы.

План биобезопасности фермы состоит из двух частей:

1. Меры по снижению риска занесения на территорию инфекционных болезней, вредителей или сорняков.
2. Меры по снижению риска распространения инфекционных заболеваний, вредителей или сорняков на территории.

Снижение риска занесения инфекционных болезней, вредителей или сорняков

Введенный запас

• Закупайте запасы у надежных поставщиков, которые заботятся о биобезопасности. Если возможно, осмотрите перед покупкой.
• Держите прибывающий домашний скот отдельно от домашнего скота, уже находящегося на территории, до тех пор, пока не будут получены результаты скринингового теста на заболевание, позволяющие разрешить проникновение на территорию.
• Приобретите акции с таким же или более высоким состоянием здоровья, что и ваши собственные. Настаивайте на наличии всей соответствующей документации:

Аккредитованные производители животноводческой продукции (LPA) теперь имеют возможность заполнять свои декларации онлайн через систему eNVD. Доступ к системе eNVD можно получить через сервисный центр LPA.Узнайте больше о системе eNVD.

• Для перевозки скота используйте транспортную систему, аккредитованную TruckSafe Animal Welfare.
• Обработайте поступающий скот подходящими средствами для полива и вакцинацией и держите их в течение не менее 24 дворов, чтобы они высыпались.
• Обеспечьте актуальность записей о складских операциях и движении.
• Поместить в карантин и контролировать поступающие запасы не менее семи дней. Увеличьте этот период, если есть подозрение на гниль или болезнь Джона у овец.
• Проверьте количество фекальных яиц в введенном бульоне через 10–14 дней, чтобы убедиться, что все желудочно-кишечные черви удалены.
• Заготовленный домашний скот мог быть подвержен нескольким потенциальным источникам болезней (проезжая часть, бродячий или постоянно проживающий скот на приусадебной территории, грузовики). Карантинные животные, вернувшиеся в приют.
• Животные на выставках или распродажах могут быть подвержены болезням. Будьте бдительны и держите их как можно более изолированными и, если возможно, используйте собственное оборудование для кормления и поения.

Транспортные средства / движение людей

• Транспортные средства посетителей могут загрязнять собственность. Ограничьте движение неимущественных транспортных средств.
• Навоз инфицированных животных может распространять болезни. Будьте бдительны с транспортом скота.
• Знайте, кто и что приходит и уходит из вашей собственности. Иметь единую точку доступа.
• Оборудование подрядчиков может распространять болезни, такие как гниль или вши. Поощряйте использование защитной одежды и мытье рук и обуви.

Подача запаса

• Источник питания от надежного поставщика, работающего в рамках программы обеспечения качества.
• Попытайтесь получить запас корма на местном уровне.
• Скармливание жвачных животных ограниченным животным материалом (RAM) и свиней запрещается в Австралии, так как это привело к заболеваниям, включая губчатую энцефалопатию крупного рогатого скота (BSE) и ящур (ящур) в других странах.
• Не кормите крупный рогатый скот, овец или коз мясом, костной мукой или другими запрещенными материалами.Сало — единственный продукт животного происхождения, который можно законно скармливать скоту.
• При покупке кормов всегда запрашивайте полностью заполненную Декларацию поставщика товаров, Декларацию поставщика побочных продуктов или Декларацию кормов и убедитесь, что в кормах нет ОЗУ и других загрязняющих веществ.

Границы

• Убедитесь, что все границы находятся в хорошем состоянии и безопасны.

Дикие животные и дикая природа

• Контролируйте там, где это возможно, и работайте с соседями для максимальной эффективности.

Снизить риск распространения инфекционных болезней, вредителей или сорняков

Регулярное наблюдение и расследование болезней или смерти животных

• Регулярно наблюдайте за домашним скотом и расследуйте вспышки болезней и смертность. Удалите и изолируйте больных животных.
• Сообщайте о случаях необычной болезни или смерти ветеринару или государственному служащему.
• По возможности записывайте количество смертей для выявления значительного увеличения.

Поддерживать надлежащие методы охраны здоровья животных

• Создать и поддерживать план охраны здоровья стада или стада.Включите в план лошадей, служебных собак и домашних животных.
• Используйте опытных операторов для реализации плана.

Транспортные средства / движение людей

• Последними прогоняйте зараженных животных или животных с паразитами по дворам.
• После работы с больными животными тщательно вымыть руки и переодеться.

Подача запаса

• Убедитесь, что корм не заражен домашними животными, дикими животными, домашним скотом или паразитами.
• Храните корм в чистом, сухом месте и проверяйте его, чтобы убедиться, что он все еще находится в идеальном состоянии после кормления.

  No related posts.